293T 细胞是一种广泛用于生物医学研究的永生化的人胚肾细胞系。它们具有高转染效率、快速生长和易于培养等特点荣发胶囊，使其成为研究基因表达、蛋白质相互作用和病毒感染的理想模型。掌握 293T 细胞的有效传代技术至关重要，因为它可以确保细胞的健康、活力和实验结果的可靠性。

293T 细胞通常在含 10% 牛血清 (FBS) 的杜尔伯科改良鹰氏培养基 (DMEM) 中培养。培养物应存放在 37°C、5% 二氧化碳的潮湿环境中。定期检查培养物并根据需要进行分瓶传代，以维持细胞的最佳生长。

1. 制备培养皿： 使用含培养基和 10% FBS 的培养皿，确保培养皿表面均匀覆盖培养基。

2. 移除培养基： 小心地从培养瓶中移除培养基，避免搅动细胞。

3. 洗涤细胞： 用无血清培养基或 1X PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。

4. 胰酶消化： 向培养瓶中加入足够量的胰酶溶液荣发胶囊，使细胞释放，一般为每瓶 1-2 mL。将培养瓶在 37°C 培养箱中孵育 3-5 分钟或直至细胞脱离。

5. 终止消化： 当细胞脱离时，用含 10% FBS 的培养基终止胰酶消化。轻轻吹打悬浮细胞以获得单细胞悬液。

6. 计数和稀释： 使用血细胞计数器计数细胞并以适当的浓度稀释细胞悬液。通常，将细胞稀释到 10^6-10^7 个细胞/mL。

7. 分瓶： 将稀释后的细胞悬液接种到新的培养皿中。根据培养皿大小调整接种量，一般为每 10 cm2 培养皿接种 1-2 mL 细胞悬液。

8. 孵育和监测： 将细胞置于 37°C、5% 二氧化碳的孵育器中孵育。24 小时后检查细胞贴壁情况，并根据需要添加培养基。

293T 细胞的传代频率取决于细胞的生长速度和健康状况。细胞在达到 70-80% 汇合度时进行传代。过早传代会导致细胞生长缓慢或死亡，而过晚传代会导致细胞贴壁过密和营养耗尽。

1. 无菌操作： 始终保持无菌操作以防止细胞污染。使用无菌耗材和小心操作可以最大限度地减少污染风险。

2. 细胞健康： 传代时检查细胞的健康状况非常重要。健康的细胞应呈梭形或圆形，贴壁紧密，无明显碎片或漂浮细胞。

3. 胰酶优化： 胰酶浓度和消化时间应根据细胞贴壁程度进行优化。过度的胰酶消化会导致细胞损伤，而消化不足会导致细胞脱离效率低。

4. 培养基更换： 定期更换培养基以提供新鲜的营养和去除细胞代谢废物。每 2-3 天更换一次培养基即可。

熟练掌握 293T 细胞的传代技术是成功进行生物医学研究的关键。通过遵循正确的步骤、优化条件并注意实验要点荣发胶囊，可以确保培养健康、活力的细胞，并为准确可靠的实验结果奠定基础。